Общая часть, микробиология
Общая часть, микробиология
Необходимо помнить, что при посеве сапрофитных микроорганизмов из окружающей среды случайно может быть внесена и патогенная микрофлора. Работа с сапрофитными бактериями в ряде случаев требует абсолютной стерильности для получения надежных результатов опыта. В микробиологической практике используют главным образом чистые культуры микроорганизмов. Культуру, содержащую микроорганизмы одного вида, называют чистой. Если в культуре содержится более одного вида микроорганизмов, она носит название смешанной.
Микробиологическая лаборатория включает ряд помещений, где проводят работу с микроорганизмами или подготовку к ней. Поверхность столов и пол всех лабораторных помещений покрывают легко моющимся материалом. В основном рабочем помещении находятся аппаратура, посуда и реактивы. Столы имеют подводку электроэнергии и снабжены газовыми горелками.
Стерилизационная: автоклавы, сушильные шкафы, термостаты, холодильная комната
Кроме основного рабочего помещения лаборатория имеет стерилизационную, где размещено лабораторное оборудование и приборы автоклавы и сушильные шкафы, бокс, моечную, холодильную комнату, термостаты или термостатированные комнаты для выращивания микроорганизмов, помещение для хранения культур и т.д.
Подготовка микробиологической лаборатории к работе Для того чтобы снизить количество микроорганизмов в воздухе и на различных поверхностях, в лабораторных помещениях применяют различные способы дезинфекции. Слово «дезинфекция» означает обеззараживание, то есть уничтожение возбудителей инфекционных болезней на объектах внешней среды.
Помешение микробиологической лаборатории
Пол, стены и мебель в микробиологической лаборатории протирают растворами различных дезинфицирующих веществ
Для проведения дезинфекции помешения можно применять готовые растворы или приготовить самим. Следующие пропорции
| 2 - 3%-ный раствор соды (бикарбоната натрия) | 2 - 3% soda solution (sodium bicarbonate) |
| 3 - 5%-ный раствор фенола (карболовой кислоты) | 3 - 5% solution of phenol (carbolic acid) |
| лизол (препарат фенола с добавлением зеленого мыла), | Lysol (phenol preparation with the addition of green soap), |
| 0,5 - 3%-ный водный раствор хлорамина | 0.5 - 3% aqueous solution of chloramine |
| а также другие дезинфектанты. | as well as other disinfectants. |
Воздух дезинфицировать проветриванием
Воздух в лаборатории наиболее просто дезинфицировать проветриванием. Продолжительная вентиляция помещения через форточку (не менее 30-60 мин) приводит к резкому снижению количества микроорганизмов в воздухе, особенно при значительной разнице в температуре между наружным воздухом и воздухом помещения. Более эффективный и наиболее часто применяемый способ дезинфекции воздуха - облучение ультрафиолетовыми лучами с длиной волны от 200 до 400 нм. Ультрафиолетовые лучи обладают слабой проникающей способностью, поэтому в зависимости от степени загрязненности воздуха для его стерилизации требуется облучение от 30 мин до нескольких часов.
Бактерицидная лампа и ультрафиолетовые лучи
Необходимо иметь в виду, что ультрафиолетовые лучи могут вызвать тяжелые поражения глаз. Поэтому при работе с бактерицидными лампами нужно строго следить за тем, чтобы ни прямые, ни отраженные ультрафиолетовые лучи не попадали в глаза.
Рабочее место, где непосредственно проводится работа с культурами микроорганизмов, требует особенно тщательной обработки.
Рабочий стол следует дезинфицировать не только до начала работы, но и после ее окончания. Для протирания поверхности стола можно использовать растворы лизола и хлорамина, а также 70%-ные (по объему) растворы изопропилового или этилового спиртов.
В лаборатории не разрешается курить, хранить и употреблять еду, напитки, жевательную резинку.
Рабочим специалистам и лаборантам необходимо работать в халатах.
Правила работы с культурами микроорганизмов
В лаборатории микроорганизмы выращивают в питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы, матрацы и чашки Петри.
Посев или инокуляцией внесение микроорганизмов
Внесение микроорганизмов в стерильную среду называется посевом, или инокуляцией. Перед посевом следует тщательно надписать на пробирке (колбе или чашке Петри) название микроорганизма и дату посева. Надпись делают маркером на стекле или на наклеенной этикетке. Клетки микроорганизмов для посева или приготовления препаратов берут бактериологической петлей, если микроорганизмы выращены на плотной среде.
В том случае, когда пересевают культуры микроорганизмов, выросшие в жидкой питательной среде, пользуются стерильной пипеткой. Использованную пипетку следует немедленно перенести в дезинфицирующий раствор, например 3 - 5%-ный водный раствор фенола или 2%-ный раствор хлорамина, не касаясь ею окружающих предметов.
Все манипуляции при посеве следует проводить около пламени горелки (но не в пламени).
Методы стерилизации питательных сред и посуды, микробиология / Methods of sterilization of nutrient media and dishes, microbiology
Стерилизация является одним из важнейших и необходимых приемов в микробиологической практике. Слово «стерилизация» в переводе с латинского означает обеспложивание. В практической работе под стерилизацией понимают методы, применяемые для уничтожения всех форм жизни как на поверхности, так и внутри стерилизуемых объектов. Различают термическую и холодную стерилизацию. Способы термической стерилизации: прокаливание в пламени и обжигание, сухожаровая стерилизация (горячим воздухом), стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование), дробная стерилизация (тиндализация), кипячение. Методы холодной стерилизации: стерилизация фильтрованием, газообразными средствами, ультрафиолетовыми лучами и другими видами излучений.
Физико-химические свойства материала и стерилизация / Physical and chemical properties of the material and sterilization
Возможность и целесообразность применения того или иного способа определяется в первую очередь физико-химическими свойствами материала, подлежащего стерилизации, а иногда и целью исследования.
Стерилизация питательных сред насыщенным паром под давлением (автоклавирование) Совместное действие высокой температуры и давления пара обеспечивает особую эффективность данного способа (табл. 1).
Таблица 1
Температура насыщенного пара при разных давлениях Давление Температура, нормальное, атм кПа °С 1,0 101,32 100 1,5 151,98 111 2,0 202,65 121 2,5 251,20 128 3,0 299,75 134 При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Установлено, что споры большинства микроорганизмов не выдержи6 вают и 5-минутную экспозицию в насыщенном паре при 121 °С.
Стерилизацию текучим паром под давлением осуществляют в автоклавах. Автоклав представляет собой металлический двустенный резервуар, способный выдерживать высокое давление, в который помещают стерилизуемый материал на специальную подставку. Предметы следует размещать не слишком плотно, так как пар должен проходить между ними, иначе они не нагреваются до нужной температуры и могут остаться нестерильными. По окончании времени стерилизации автоклав открывают, когда давление в нем сравняется с атмосферным. Преждевременное открывание крана автоклава недопустимо, так как перегретые среды при резком снижении давления сразу же бурно закипают, смачивают и даже иногда выталкивают ватные пробки, что нарушает впоследствии стерильность материала. К работе с автоклавом допускаются только подготовленные лица! Подготовка сред к стерилизации.
При автоклавировании 3 - 5 % жидкости теряются в результате испарения, поэтому рекомендуется в приготавливаемые среды добавлять сверх объема примерно 5% дистиллированной воды. Тогда после стерилизации среда (раствор) будет иметь требуемую концентрацию. Среды обычно стерилизуют в пробирках, колбах, бутылях.
Емкости заполняют средой не более чем на половину их высоты, чтобы предотвратить смачивание пробок. Сосуды со средами закрывают ватными пробками с бумажными колпачками. Стеклянные, резиновые, корковые и другие пробки завертывают в двойной слой оберточной бумаги и стерилизуют привязанными к склянке, закрытой ватной пробкой. Выбор режима автоклавирования. В микробиологической практике стерилизацию в автоклавах осуществляют при температуре в пределах 111-138 °С, т.е. от 0,5 до 2,5 атм. Температура ниже 111 °С не может считаться надежной; а выше 138 0С, как правило, не является необходимой, к тому же, чем выше давление пара, тем сложнее условия эксплуатации автоклава. Микробиологи чаще всего стерилизуют среды при 0,5 и 1 атм. Температура и длительность автоклавирования питательных сред определяются, прежде всего, их составом, термоустойчивостью или термолабильностью компонентов.
Стерилизация легко разрушающиеся субстраты при 0,5 атм в течение 15-30 мин / Sterilization of easily degraded substrates at 0.5 atm for 15-30 minutes
Мясопептонные среды можно стерилизовать при 1,0 атм 20 мин. С трудом поддаются стерилизации в автоклаве различные порошки (например тальк) и вязкие жидкости (глицерин, вазелиновое масло), поэтому их лучше стерилизовать в сушильных шкафах при 160 °С в течение 2 или 1 ч при 170 °С. В этом случае слой масла или порошка в сосуде не должен превышать 1,5 см. После автоклавирования среды для проверки стерильности выдерживают 2 - 3 сут в термостате при 30 0С. Если в средах обнаруживается рост микроорганизмов, их готовят заново.
Дробная стерилизация (тиндализация) и пастеризация Тиндализация, дробная стерилизация, была предложена в 1877 г. Тиндалем. Она применяется для сред, портящихся под действием температур выше 100 °С. Тиндализацию осуществляют текучим паром а автоклаве с незавинченной крышкой или в аппарате Коха. Среды прогревают несколько раз по 10 - 15 мин. Между прогреваниями среды ставят в термостат при температуре 3 0 0 С н а 8 - 1 2 ч для прорастания жизнеспособных спор. Среды, не выдерживающие нагревания при 100 °С, прогревают более осторожно при 60 - 80 °С через каждые 8 - 1 2 ч 4 - 5 дней подряд. Однократный прогрев материала при температуре ниже 100 0С известен под названием пастеризация. Этот метод, предложенный Пастером, предназначен для уничтожения только бесспоровых форм микроорганизмов. Следовательно, в подавляющем большинстве случаев он не обеспечивает стерильности.
Пастеризацию проводят при 60-80 0С 10 - 30 мин. Этот процесс используют в пищевой промышленности для обработки молока, фруктовых соков, вина, пива и др.
Стерилизация фильтрованием Фильтрованием стерилизуют синтетические среды строго определенного состава, которые содержат легкоразрушающиеся или летучие компоненты - витамины, аминокислоты (цистеин и цистин), белки, углеводы, антибиотики и др. Фильтрование жидкостей осуществляют через мелкопористые материалы, легко адсорбирующие клетки микроорганизмов: асбест, целлюлозу, фарфор, каолин и др.
Стерилизующими фильтрами теоретически считают такие, размер пор которых не превышает 0,20 мкм. Наиболее широкое распространение в микробиологической практике получили мембранные фильтры, которые в зависимости от величины пор применяют для фильтрования и стерилизации. Для стерилизации используют отечественные фильтры фирм «Владипор», «Владисарт» с диаметром пор 0,20 мкм. Плотные диски, изготовленные из смеси асбеста с целлюлозой, называются фильтрами Зейтца. В зависимости от диаметра пор они обозначаются разными индексами.
Стерилизующими являются СФ-3 и СФ-4. Мембранные фильтры стерилизуют автоклавированием при 1 атм 15 мин или длительным кипячением. Стерилизация стеклянной посуды. Основным способом стерилизации стеклянной посуды является обработка ее сухим горячим воздухом при температуре не выше 180 ° в течение 1 - 3 ч (табл. 2). При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухожаровых) стерилизаторах и сушильных шкафах, приспособленных для стерилизации и обеспечивающих автоматическое поддержание необходимой температуры.
Таблица 2 Время, необходимое для стерилизации стеклянной посуды сухим жаром Температура, °С Время, мин 140 180 150 150 160 120 170 60 Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. После этого еѐ загружают в стерилизатор (или в сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого материала. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80 °С, так как при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Стерилизация инструментов и приборов.
Стерилизация прокаливанием в пламени перед использованием, металлические инструменты / Flame sterilization before use, metal tools
На пламени кратковременно обжигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при посевах культур и разливе сред. В пламени погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Шприцы лучше всего стерилизовать сухим жаром при 160 0С либо в собранном, либо в разобранном виде. В первом случае длительность стерилизации 75, во втором - 60 мин. Собранные шприцы вместе с иглой стерилизуют в пробирке, закрытой ватной пробкой, разобранные заворачивают в бумагу или ткань.
Можно стерилизовать шприцы и в автоклаве при 1 атм в течение 15-20 мин. Автоклавируют их только в разобранном виде, иначе они повреждаются.
Стерилизация газообразными веществами / Sterilization with gaseous substances
Лабораторную аппаратуру, имеющую зеркальное, оптическое и радиоэлектронное оборудование, а также изделия из термолабильных пластмасс, например центрифужные пробирки, стерилизуют газовым методом. Для газовой стерилизации применяются только те соединения, которые обладают спороцидными свойствами. Это оксид этилена, метилбромид, оксид пропилена, формальдегид, глютаральдегид, бета-пропиолактон, озон и др. Газовую стерилизацию проводят в специальных герметически закрывающихся аппаратах.
Стерилизуемые объекты, помещаемые в камеру, упаковывают как при стерилизации в автоклаве или сушильном шкафу. При проведении газовой стерилизации строго соблюдают правила работы с ядовитыми газообразными веществами. Стерилизация облучением Для стерилизации помещений, оборудования, некоторых медицинских принадлежностей, пищевых продуктов используют различные виды излучений: инфракрасное, ультрафиолетовое, рентгеновские лучи, а-, Р- и у-лучи радиоактивных элементов. Чаще других в микробиологической практике используют ультрафиолетовое облучение. Мощность ультрафиолета измеряется в бактах. Доза УФ-излучения, губительная для различных видов микроорганизмов (кроме спор), составляет 5 мкб/см2
Лабораторная работа № 1. Оборудование микробиологической лаборатории и подготовка посуды к стерилизации, микробиология
Цель работы. Ознакомление с правилами работы в микробиологической лаборатории, с особенностями подготовки помещения, оборудования и лабораторной посуды к работе с микроорганизмами.
Материалы и оборудование: термостат, центрифуги, автоклав, сушильный шкаф, фильтры, бактерицидные лампы, пипетки, чашки Петри, шпатели, пробирки, колбы, предметные стекла, пергаментная бумага, вата, марля.
Ход выполнения работы.
Ознакомьтесь с устройством и применением основных приборов и оборудования микробиологической лаборатории.
В соответствии с описанием этого процесса в теоретической части выполните следующие действия, а именно подготовьте к стерилизации:
| 1) | стеклянную посуду: пипетки, пробирки, колбы, чашки Петри; | glassware: pipettes, test tubes, flasks, Petri dishes; |
| 2) | ватно-марлевые и резиновые пробки, металлические инструменты (ножницы, пинцеты, шприцы и иглы); | cotton gauze and rubber stoppers, metal tools (scissors, tweezers, syringes and needles); |
| 3) | фильтровальную установку «Владисарт» и мембранные фильтры. | Vladisart filter installation and membrane filters. |
Методы приготовления препаратов для микроскопии, микробиология
Микроскопия Изучение морфологии и строения клеток микроорганизмов, величина которых измеряется в большинстве случаев микрометрами (1 мкм = = 10 мм =10 м), возможно только с помощью микроскопов, обеспечивающих увеличение исследуемых объектов в сотни (световая микроскопия) и десятки тысяч (электронная микроскопия) раз. Изображение в световом микроскопе формируется вследствие того, что объект и различные элементы его структуры избирательно поглощают свет с различной длиной волны (абсорбционный контраст) или вследствие изменения фазы световой волны при прохождении света через объект (фазовый контраст). Световая микроскопия включает в себя обычную просвечивающую микроскопию (светло- и темнопольную), фазово-контрастную и люминесцентную.
Светлопольная микроскопия. Существуют различные модели учебных и исследовательских световых микроскопов, которые позволяют определить форму клеток микроорганизмов, их размер, подвижность, степень морфологической гетерогенности, а также характерную для микроорганизмов способность к дифференцирующему окрашиванию. Правила пользования микроскопом. Строгое соблюдение правил пользования микроскопом является непременным условием для каждого работающего с ним.
При работе необходимо соблюдать следующую последовательность:
- Устанавливают микроскоп в рабочее положение, т.е. так, чтобы колонка была обращена в сторону исследователя, а зеркало - в направлении источника света.
- Ставят под тубус, пользуясь револьвером, объектив малого увеличения. Как правило, предмет рассматривают вначале при малом увеличении.
- Проверив, открыта ли диафрагма и поднят ли конденсор, вращают, глядя в окуляр, зеркало и устанавливают его так, чтобы поле зрения оказалось хорошо освещенным.
- Помещают препарат на предметный столик микроскопа так, чтобы рассматриваемый объект оказался над отверстием столика. Препарат закрепляют с помощью клемм.
- Находят фокусное расстояние, для чего опускают или поднимают тубус с помощью макрометрического винта. Для окончательной фокусировки пользуются микрометрическим винтом.
При смене объектива, дающего малое увеличение, на объектив большего увеличения требуется соблюдение следующих правил:
| 1 | Прежде чем сменить объектив, рассматриваемый объект (или его участок) ставят в центре поля зрения микроскопа при малом увеличении. Диаметр линзы уменьшается по мере возрастания степени увеличения, вследствие чего объект, если он лежит не в центре, при смене объектива может оказаться за пределами поля зрения. | Before changing the lens, the object in question (or its section) is placed in the center of the field of view of the microscope at low magnification. The diameter of the lens decreases as the magnification increases, as a result of which the object, if it is not in the center, may be out of sight when the lens is changed. |
| 2 | Слегка приподнимают тубус и затем переводят объектив с помо щью револьвера. Это необходимо потому, что объектив большего увели чения всегда бывает длиннее. | Slightly raise the tube and then transfer the lens with a revolver. This is necessary because the lens of higher magnification is always longer. |
| 3 | Для того чтобы в поисках фокусного расстояния не раздавить пре парат или, что еще хуже, не повредить линзу объектива, тубус с подведеннымпод него объективом, глядя для контроля сбоку микроскопа, опускают до самой поверхности препарата и затем, смотря в окуляр, очень медленно (чтобы не пропустить появления очертаний предмета) поднимают. | In order not to crush the preparation or, even worse, to damage the objective lens, while searching for the focal length, the tube with the objective underneath it, looking to control the side of the microscope, is lowered to the surface of the preparation and then, looking into the eyepiece, very slowly (so as not to miss the appearance of the outlines of the subject) raise. |
Рассматривают препарат в микроскоп левым глазом. Правый глаз при этом должен оставаться открытым. Левую руку держат на микрометрическом винте и слегка вращают его (влево и вправо).
Этим достигается возможность рассмотрения поверхностных и более глубоких участков объекта. Правой (свободной) рукой делают зарисовку того, что видно в поле зрения.
Правила работы с иммерсионным объективом. Сухой окрашенный препарат (приготовление см. ниже) помещают на столик микроскопа и, пользуясь объективом 8х, устанавливают свет.
Затем в центр препарата на мазок наносят каплю иммерсионного масла и заменяют сухую систему иммерсионной. С помощью макрометрического винта опускают тубус микроскопа до погружения объектива в масло. Эту операцию нужно проводить очень осторожно, следя сбоку за тем, чтобы фронтальная линза не коснулась предметного стекла и не получила повреждения. После погружения объектива в масло осторожно, также пользуясь макровинтом, поднимают тубус и, наблюдая в окуляр, находят плоскость препарата. Точная фокусировка достигается с помощью микрометрического винта. По окончании микроскопирования поднимают тубус, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива сначала сухой хлопчатобумажной салфеткой, а затем той же салфеткой, но слегка смоченной ксилолом. Оставлять масло на поверхности линзы ни в коем случае нельзя, так как оно способствует фиксированию пыли и может со временем привести к повреждению оптики микроскопа. Изучение микроорганизмов в световом микроскопе.
Выбор методов микроскопического анализа и способов окраски определяется конкретной целью исследования.
Препараты готовят, как правило, на предметных стеклах, толщина которых не должна превышать 1,2 - 1,4 мм. Применение более толстых стекол не позволяет получить резкое изображение краев диафрагмы осветителя в плоскости препарата. Поверхность стекла должна быть тщательно очищена и обезжирена, чтобы капля жидкости равномерно расплывалась по стеклу. Это достигается протиранием стекол ватой, смоченной эфиром (после этого промывание водой не требуется), или обжиганием поверхности стекол в пламени горелки (жир при этом сгорает).
Покровные стекла, применяемые для приготовления препаратов микроорганизмов, также должны быть тщательно вымыты и высушены. Толщина покровных стекол не должна превышать 0,15-0,17 мм. Более толстые покровные стекла резко ухудшают качество получаемого изображения. Препараты живых клеток микроорганизмов
1. «Раздавленная капля». На предметное стекло наносят каплю водопроводной воды и помещают в нее небольшое количество клеток изучаемых микроорганизмов, размешивают и накрывают покровным стеклом. Микроорганизмы, выращенные на плотной питательной среде, переносят в каплю воды бактериологической петлей, выращенные в жидкой среде - стерильной пипеткой. В этом случае каплю воды на предметное стекло можно не наносить. Капля исследуемого материала должна быть настолько мала, чтобы после прижимания ее покровным стеклом не было избытка жидкости, выступающего из-под него. В противном случае избыток жид кости необходимо удалить фильтровальной бумагой.
2. «Висячая капля». Каплю суспензии микроорганизмов петлей наносят на покровное стекло, которое поворачивают каплей вниз и помещают на специальное предметное стекло с углублением (лункой) в центре. Капля должна висеть свободно, не касаясь краев и дна лунки. Края лунки предварительно смазывают вазелином. Капля оказывается герметизированной во влажной камере, что делает возможным многодневное наблюдение за объектом. Для длительных наблюдений используют стерильные стекла, а суспензию микроорганизмов готовят на жидкой питательной среде. Препараты фиксированных окрашенных клеток микроорганизмов
Приготовление фиксированных окрашенных препаратов включает следующие этапы: приготовление мазка, высушивание, фиксацию и окраску.
1. Приготовление мазка. На обезжиренное спиртом предметное стекло помещают маленькую каплю водопроводной воды и переносят в нее петлей небольшое количество исследуемого материала как для препарата «раздавленная капля». Полученную суспензию равномерно размазывают петлей на площади 1 - 2 см2 возможно более тонким слоем. Мазок должен быть настолько тонок, чтобы высыхал после приготовления.
2. Высушивание мазка. Лучше всего сушить готовый препарат при комнатной температуре на воздухе. Хорошо приготовленный тонкий мазок высыхает быстро. Если высушивание мазка замедлено, то препарат можно слегка нагреть в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, держа стекло мазком вверх. Эту операцию следует проводить осторожно, не перегревая мазка, иначе клетки микроорганизмов деформируются.
3. Фиксация препарата преследует несколько целей: убить микроорганизмы, то есть сделать безопасным дальнейшее обращение с ними; обес печить лучшее прилипание клеток к стеклу; сделать мазок более восприимчивым к окраске, так как мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые. Самым распространенным способом фиксации является термическая обработка. Для этого препарат трижды проводят через наиболее горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх. Не следует перегревать мазок, так как при этом происходят грубые изменения клеточных структур, а иногда и внешнего вида клеток, например их сморщивание. Для исследования тонкого строения клетки прибегают к фиксации различными химическими веществами. Фиксирующую жидкость наливают на мазок, либо препарат на определенное время погружают в стакан с фиксатором.
4. Окраска. Клетки микроорганизмов окрашивают главным образом анилиновыми красителями. Различают простые и дифференциальные спо собы окрашивания микроорганизмов. При простой окраске прокрашивается вся клетка, так что становятся хорошо видны ее форма и размеры. Дифференциальная окраска предполагает окрашивание не всей клетки, а опре деленных ее структур. С помощью дифференциальной окраски выявляют некоторые клеточные структуры и запасные вещества. Для простого окрашивания клеток микроорганизмов чаще всего пользуются фуксином, генциановым фиолетовым, метиленовым синим. Для получения более чистых препаратов краситель наливают на мазок, покрытый фильтровальной бумагой.
Метод окрашивания в модификации
Синева позволяет использовать вместо растворов красителей фильтровальную бумагу, заранее пропитанную красителем. В правильно окрашенном и хорошо промытом препарате поле зрения светлое и чистое, окрашены только клетки микроорганизмов. Фиксированные, окрашенные препараты могут храниться длительное время. Необходимо помнить, что возраст культуры, состав среды и условия культивирования существенно влияют на морфологию и цитологию микроорганизмов.
Лабораторная работа № 2. Устройство биологического микроскопа, типы микроскопии и правила пользования иммерсионным объективом микроскопа, микробиология
Устройство биологического микроскопа, типы микроскопии и правила пользования иммерсионным объективом микроскопа
Цель работы. Изучить устройство биологического микроскопа, различных типов микроскопии, правила пользования иммерсионным объективом микроскопа.
Материалы и оборудование.
Микроскоп, предметные стекла, покровные стекла, пинцет, бактериологическая петля, спиртовка, спички, карандаш по стеклу, столик для окраски мазков, пипетки объемом 1 и 2 см3 , дистиллированная вода, пергамент, готовые препараты для микроскопии, иммерсионное масло для микроскопии.
Ход выполнения работы.
В соответствии с описанием в теоретической части выполните следующие задания:
| 1) | Вспомните устройство светового микроскопа и правила работы с ним. | Remember the device of the light microscope and the rules for working with it. |
| 2) | Рассмотрите под иммерсионным объективом готовые препараты фиксированных и окрашенных бактерий в последовательности указанной, преподавателем. | Look under the immersion lens for ready-made preparations of fixed and stained bacteria in the sequence indicated by the teacher. |
| 3) | Зарисуйте изученные препараты. | Sketch the studied drugs. |
Лабораторная работа № 3. Приготовление прижизненных препаратов клеток микроорганизмов, микробиология
Приготовление прижизненных препаратов клеток микроорганизмов
Цель работы. Освоить методы приготовления препаратов живых клеток микроорганизмов для микроскопии.
Материалы и оборудование.
Микроскоп, предметные стекла, покровные стекла, пинцет, бактериологическая петля, спиртовка, спички, карандаш по стеклу, столик для окраски мазков, пипетки объемом 1 и 2 см3 дистиллированная вода, чистая культура микроорганизмов, красители (метиленовый синий, основной фуксин, карболовый фуксин, малахитовый зеленый), готовые препараты для микроскопии.
Ход выполнения работы.
В соответствии с описанием методов приготовления препаратов в теоретической части выполните следующие задания:
| 1) | Приготовьте препарат «раздавленная капля», изучите и зарисуйте в альбом. | Prepare the drug "crushed drop", study and draw in the album. |
| 2) | Приготовьте препарат «висячая капля», изучите и зарисуйте в альбом. | Prepare the drug "hanging drop", study and draw in the album. |
Лабораторная работа № 4. Препараты фиксированных окрашенных клеток микроорганизмов, микробиология
Препараты фиксированных окрашенных клеток микроорганизмов Цель работы.
Освоить методы приготовления фиксированных окрашенных клеток микроорганизмов для микроскопии.
Материалы и оборудование
. Микроскоп, предметные стекла, пинцет, бактериологическая петля, спиртовка, спички, карандаш по стеклу, столик для окраски мазков, пипетки объемом 1 и 2 см3 , дистиллированная вода, пергамент, чистая культура микроорганизмов, красители (метиленовый синий, основной фуксин, карболовый фуксин, малахитовый зеленый), иммерсионное масло для микроскопии. Ход выполнения работы.
В соответствии с описанием приготовления фиксированных окрашенных клеток микроорганизмов в теоретической части выполните следующие задания:
- Приготовьте препарат фиксированных окрашенных клеток бакте рий E.coli.
- Изучите препарат и зарисуйте его в альбом.
Изучение морфологии и клеточных структур микроорганизмов посредством световой микроскопии, микробиология
Морфология грибов, микробиология
Морфология грибов Грибы (Fungi, Mycetes) - разнородная группа эукариотических микроорганизмов. Грибы имеют ядро с ядерной оболочкой, цитоплазму с органеллами, цитоплазматическую мембрану (которая содержит фосфолипиды и стеролы) и мощную клеточную стенку из глюкана, целлюлозы, хитина, белка, липидов и др. Грибы состоят из длинных тонких нитей (гиф), сплетающихся в грибницу, или мицелий. Гифы низших грибов - фикомицетов - не имеют перегородок. У высших грибов - эумицетов - гифы раз20 делены перегородками; их мицелий многоклеточный. Эумицеты представлены аскомицетами и базидиомицетами (совершенные грибы), а также дейтеромицетами (несовершенные грибы). К аскомицетам относятся представители родов Aspergillus, Penicillium и др. Представителями аскомицетов являются и дрожжи - одноклеточные грибы, утратившие способность к образованию истинного мицелия. Дрожжи имеют овальную форму клеток, диаметр которых 3-15 мкм. Они размножаются почкованием, бинарным делением (делятся на две равные клетки) или половым путем с образованием аскоспор.Морфология простейших, микробиология
Морфология простейших Простейшие - эукариотические одноклеточные микроорганизмы, составляющие подцарство Protozoa царства животных (Animalia). Размеры простейших колеблются в среднем от 5 до 30 мкм. Снаружи клетки простейших окружены мембраной (пелликулой) - аналогом цитоплазматической мембраны клеток животных. Некоторые простейшие имеют опорные фибриллы. Цитоплазма и ядро соответствуют по строению эукариотическим клеткам. Передвигаются простейшие посредством жгутиков, ресничек и путем образования псевдоподий. Простейшие могут питаться в результате фагоцитоза или образования особых структур. Многие простейшие при неблагоприятных условиях образуют цисты - покоящиеся стадии, устойчивые к изменению температуры, влажности и др. Простейшие окрашиваются по Романовскому-Гимзе (ядро - красного цвета, цитоплазма - синего).Лабораторная работа № 5. Морфология бактерий, микробиология
Лабораторная работа № 5 Морфология бактерий
Цель работы
Изучить морфологию различных бактериальных клеток, некоторые методы окраски микроорганизмов.
Материалы и оборудование
Микроскоп, предметные стекла, покровные стекла, пинцет, бактериологическая петля, спиртовка, спички, карандаш по стеклу, столик для окраски мазков, пипетки объемом 1 и 2 см3 , дистиллированная вода, чистые культуры бактерий, красители (кристал21 лвиолет, фуксин Циля, метиленовый синий, основной фуксин, карболовый фуксин, малахитовый зеленый), раствор Люголя, этиловый спирт, готовые препараты бактерий, иммерсионное масло для микроскопии.
Ход выполнения работы
1. Просмотрите готовые препараты фиксированных окрашенных бактерий, изучите их и зарисуйте в альбом.
2. Приготовьте препараты фиксированных окрашенных шаровид ных клеток бактерий (род Micrococcus, Staphilococcus, Streptococcus), изу чите и зарисуйте в альбом.
3. Приготовьте препараты фиксированных окрашенных палочко видных клеток бактерий (Escherichia coli, Bacillus subtilis), изучите и зари суйте в альбом.
Лабораторная работа № 6. Морфология спирохет, микробиология
Лабораторная работа № 6 Морфология спирохет
Цель работы
Изучить морфологию спирохет, выявляемых в препарате из зубного налѐта, окрашенном негативным методом по Бурри.
Материалы и оборудование
Микроскоп, предметные стекла, покровные стекла, пинцет, стерильные палочки, бактериологическая петля, спиртовка, спички, карандаш по стеклу, столик для окраски мазков, пипетки объемом 1 и 2 см3 , дистиллированная вода, черная тушь, этиловый спирт, иммерсионное масло для микроскопии.
Ход выполнения работы
1. Приготовьте мазок из зубного налета, взятого стерильной палоч кой. Нанесите на сухой мазок раствор негативного красителя (жидкая тушь, конго красный), высушите.
2. Можно приготовить препарат вторым способом:
каплю исследуе мой суспензии бактерий смешать с красителем непосредственно на пред метном стекле, накрыть еѐ покровным стеклом.
3. Сухой препарат (или приготовленный вторым способом) рас смотрите под иммерсией.
4. Зарисуйте:
на темном фоне туши видны неокрашенные большая и малая зубные спирохеты - Spirochaeta macrodenta и Spirochaeta microdenta.
Лабораторная работа № 7. Морфология споровых микроорганизмов, микобактерий и актиномицетов, микробиология
Лабораторная работа № 7 Морфология споровых микроорганизмов, микобактерий и актиномицетов
Цель работы
Ознакомиться с морфологией споровых микроорганизмов, микобактерий и актиномицетов.
Материалы и оборудование
Микроскоп, готовые препараты споровых микроорганизмов, микобактерий и актиномицетов, иммерсионное масло для микроскопии.
Ход выполнения работы
1. Просмотрите готовые препараты микроорганизмов с иммерсион ной системой.
2. Зарисуйте каждый препарат в альбом.
Лабораторная работа № 8. Морфология дрожжевых грибов, микробиология
Лабораторная работа № 8 Морфология дрожжевых грибов
Цель работы
Изучить морфологию клеток дрожжевых грибов.
Материалы и оборудование
Микроскоп, предметные стекла, покровные стекла, пинцет, бактериологическая петля, спиртовка, спички, карандаш по стеклу, столик для окраски мазков, пипетки объемом 1 и 2 см3 , дистиллированная вода, чистые культуры дрожжей, красители (кристаллвиолет, фуксин Циля, метиленовый синий, основной фуксин, карболовый фуксин, малахитовый зеленый), раствор Люголя, этиловый спирт, иммерсионное масло для микроскопии.
Ход выполнения работы
1. Приготовьте мазок из чистой культуры дрожжей.
2. Окрасьте фиксированный мазок по Грамму.
3. Полученный препарат рассмотрите под иммерсией.
4. Зарисуйте в альбом.
Морфология клеточных структур, микробиология
Морфология клеточных структур Клеточная стенка. Тонкую структуру клеточной стенки хорошо видно лишь в электронном микроскопе. Для наблюдения клеточной стенки в световом микроскопе применяют метод темного поля либо специальную окраску, с помощью которой удается легко выявить границы между отдельными клетками, расположенными в виде длинных нитей или плотных агрегатов. На обезжиренном стекле делают мазок клеток исследуемых бактерий, высушивают его на воздухе и фиксируют в течение 5 мин 5%-ным раствором фосфоромолибденовой кислоты.
Затем препарат промывают водой и окрашивают не более 15 мин 0,02%-ным раствором кристаллвиолета. Снова промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. Клеточная стенка окрашивается в черный цвет, а цитоплазма - в бледно-сиреневый. Выявление кислотоустойчивости. Кислотоустойчивость - свойство, характерное для некоторых микобактерий и нокардий. Оно заключается в сохранении окраски клетками этих бактерий при обработке их кислотой. Наибольшее распространение получил способ выявления кислотоустойчивости по Циль-Нильсену. На обезжиренном предметном стекле готовят два мазка:
исследуемых клеток и клеток кислотоустойчивых микобактерий. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. На мазки помещают фильтровальную бумагу, заливают препарат карболовым фуксином Циля и затем 2 - 3 раза подогревают его до появления паров, держа стекло высоко над пламенем горелки. За появлением паров наблюдают, глядя на мазок сбоку, и при их появлении тотчас отставляют препарат в сторону. После этого препарату дают остыть, снимают фильтровальную бумагу, сливают краситель и мазок промывают водой. Затем препарат обесцвечивают 5%-ным раствором Н2SO
4. Для этого предметное стекло погружают 2 - 3 раза в стакан с кислотой, не задерживая его в ней. Препарат вновь тщательно промывают водой и докрашивают 3-5 мин метиловым синим по Леффлеру. Краску сливают, препарат промывают водой, высушивают и исследуют с иммерсионной системой. При строгом соблюдении режима окраски кислотоустойчивые клетки приобретают красный цвет, тогда как некислотоустойчивые - синий. Нуклеоид. Довольно четко нуклеоид обнаруживается у следующих бактерий:
Proteus vulgaris, Azotobacter chroococcum, Bacillus megaterium, 24 Bacillus mycoides, Bacillus subtilis. На предметном стекле делают мазок суточной культуры бактерий, высушивают его на воздухе и фиксируют в течение 2 - 3 мин в парах осмиевой кислоты. С этой целью на дно чашки Петри наносят 2 - 3 капли фиксатора, а предметное стекло помещают мазком вниз на обрезки стекла. По окончании фиксации препарат опускают на 2 - 3 мин в стаканчик с раствором 1 н. HCl для гидролиза рибосомальной РНК. Стакан держат на водяной бане при 60 °С. После гидролиза препарат немедленно промывают водой. Затем мазок помещают на 15 мин в 1%-ный раствор формалина, вновь промывают водой и окрашивают в течение 1 - 2 мин 0,1 - 1,0%-ным раствором основного фуксина. Препарат промывают, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. Цитоплазма окрашивается в розовый цвет, нуклеоид - в ярко-малиновый. Эндоспоры. Эндоспоры образуют бактерии родов Bacillus, Clostridium и некоторых других. Для обнаружения способности клеток к спорообразованию лучше использовать старые культуры. Споры можно обнаружить при наблюдении живых клеток, а также путем дифференциального окрашивания цитоплазмы и споры. В случае выявления у микроорганизма способности к образованию спор необходимо обратить внимание на тип спорообразования (бациллярный, клостридиальный, плектридиальный), расположение споры в клетке (центральное, эксцентральное или полярное), форму свободных спор (круглая, овальная или продолговатая) и определить их размеры. С этой целью просматривают клетки 2 - 3 - суточной культуры, так как большинство спорообразующих бактерий проходят за этот период времени все стадии развития - от вегетативной клетки до свободной споры. Наблюдение спор в живых клетках. Споры по сравнению с цитоплазмой характеризуются более высоким показателем преломления света, поэтому при микроскопировании в светлом поле они видны как более темные включения округлой или овальной формы. При использовании фазово-контрастного устройства споры имеют вид светлых включений на фоне почти черных клеток. Метод выявления спор негативным окрашиванием.
На предметном стекле готовят тонкий мазок клеток спорулирующих бактерий, подсушивают на воздухе и фиксируют в пламени. Затем на 3 - 5 мин наносят метиленовый синий или на 1 - 3 мин фуксин, после чего препарат осторожно просушивают на воздухе. Просматривают с иммерсией. Вегетативные клетки бактерий прокрашиваются, а споры, имеющие многослойную, труднопроницаемую оболочку - нет. Они видны как сильно преломляющие свет сферические или овальные образования, находящиеся в зависимости от стадии спорообразования внутри или вне клеток бактерий. Метод удобен при количественной оценке процесса спорообразования путем подсчета количества спор и вегетативных клеток в разных условиях роста бактерий. Дифференциальная окраска споры по методу Пешкова. Споры и цитоплазму окрашивают при нагревании. Промывание препарата водой ведет к обесцвечиванию цитоплазмы, тогда как спора прочно удерживает краситель. На обезжиренном предметном стекле готовят мазок, высушивают его на воздухе, фиксируют в пламени горелки и заливают раствором метиленового синего по Леффлеру. Краситель доводят до кипения, держа предметное стекло над пламенем горелки. По мере испарения красителя добавляют новые его порции. Продолжительность окраски, считая с момента закипания красителя, - 10 - 20 с. Затем предметное стекло охлаждают, препарат тщательно промывают водой, после чего клетки в течение 30 с докрашивают 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного или сафранина. Краситель сливают, препарат промывают водой и просматривают с иммерсионной системой. При правильном окрашивании клетки имеют красный цвет, а споры - синий. Вместо метиленового синего можно использовать малахитовый зеленый. В этом случае препарат, фиксированный в пламени горелки, заливают на 7 - 10 мин 7,5%-ным раствором малахитового зеленого. Окрашивание проводят с подогревом, помещая препарат над сосудом с кипящей водой или над пламенем горелки. По окончании окраски предметное стекло охлаждают, промывают препарат водой и докрашивают клетки 0,25%-ным водным раствором сафранина в течение 1 - 2 мин.
Споры окрашиваются в зеленый цвет, клетки - в розовый. Окраска капсулы. Эти структуры часто имеют консистенцию геля и плохо видны при микроскопировании живых клеток. Химический состав капсул у разных бактерий неодинаков, поэтому их нельзя выявить какимлибо одним методом окраски. Кроме того, капсулы при окраске легко деформируются, а вещество капсулы слабо связывает краситель, который легко отмывается в процессе обработки препарата. Чаще всего для выявления капсул применяют способ «негативной» окраски (негативного контрастирования) с помощью жидкой туши. Для этого небольшое количество клеток с плотной среды помещают в каплю разбавленного фуксина, смешивают с каплей туши, закрывают покровным стеклом и просматривают с объективом 40 х. На общем темном фоне препарата хорошо видны бесцветные капсулы, окружающие клетки микроорганизмов, окрашенные в розовый цвет. Окраска капсул по методу Гинса. На конец предметного стекла микробиологической петлей наносят каплю черной туши, вносят в нее клетки, хорошо перемешивают и ребром покровного стекла делают мазок по всей поверхности стекла. Мазок высушивают на воздухе и фиксируют 5 - 1 0 мин смесью Никифорова или 3 мин абсолютным метанолом. Далее мазок окрашивают карболовым фуксином Циля, разбавленным водой в соотношении 1:
3. Время окрашивания - 2 - 3 мин. Препарат промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют с иммерсионной системой. На темно-сером фоне препарата контрастно выделяются розово-малиновые клетки бактерий, окруженные бесцветными капсулами. Окраска по Граму. Эта окраска является важным диагностическим признаком, она коррелирует со многими другими свойствами бактерий. По способности окрашиваться красителями триметилфенолового ряда все бактерии делятся на две группы:
грамположительные и грамотрицательные. Грамположительные бактерии удерживают комплекс генцианового фиолетового с йодом при обработке препарата спиртом и поэтому окрашиваются в фиолетовый цвет. Грамотрицательные бактерии не обладают такой способностью и обесцвечиваются спиртом. При последующей обработке фуксином или сафранином они приобретают розовую окраску. Окраска по Граму заключается в следующем. На одном обезжиренном стекле делают мазки разных микроорганизмов:
в центре - мазок клеток исследуемой культуры, слева и справа - контрольных культур. Клетки одной контрольной культуры должны быть грамположительными (например Micrococcus luteus или Bacillus cereus), другой - грамотрицательными (например Escherichia coli). Мазки следует готовить тонкими, чтобы клетки равномерно распределялись по поверхности стекла и не образовывали скоплений.
Препарат высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают в течение 1 - 2 мин карболовым генциановым или кристаллическим фиолетовым. Затем краситель сливают и, не промывая мазок водой, обрабатывают его 1 - 2 мин раствором Люголя до почернения. Сливают раствор Люголя, препарат обесцвечивают 0,1 - 1,0 мин 96%- ным этиловым спиртом, быстро промывают водой и дополнительно окрашивают 1-2 мин водным фуксином. Краситель сливают, препарат промы27 вают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. При правильном окрашивании грамположительные бактерии имеют синефиолетовый цвет, грамотрицательные - розово-красный. Экспресс-метод определения грам-типа микроорганизмов. Метод основан на разрушении клеток грамотрицательных бактерий в щелочной среде и определении свободной ДНК. Для этого на предметное стекло наносят каплю 3%-ного раствора КОН и 1 петлю 24-часовой исследуемой агаровой культуры, тщательно перемешивают. При тестировании грамотрицательных культур через 5 - 7 с при движении петли вверх образуется слизистый след длиной 1 -2 см; если слизь не образуется, то тестируемая культура грамположительная.
Лабораторная работа № 9. Окраска бактерий по Граму, микробиология
Лабораторная работа № 9 Окраска бактерий по Граму
Цель работы
Ознакомиться с техникой окраски бактерий по Граму.
Материалы и оборудование
Микроскоп, предметные стекла, бактериологическая петля, спиртовка, чистые предметные стекла, столик для окрашивания препаратов, промывалка с водой, красящая бумага с кристаллвиолетом или 1%-ный раствор кристаллвиолета или генцианвиолета, раствор Люголя, 96%-ный этанол, 0,1%-ный раствор фуксина или раствор Пфейфера, чистые культуры контрольных (с известным типом окраски) грамположительных и грамотрицательных бактерий и исследуемые микроорганизмы, иммерсионное масло для микроскопии.
Ход выполнения работы
1. Приготовьте на одном предметном стекле три фиксированных мазка бактерий:
а) контрольной грамотрицательной культуры с одного конца стекла; б) контрольной грамположительной культуры с другого кон ца стекла и в) исследуемой культуры в центре стекла. Мазки должны быть тонкими, клетки бактерий должны быть равномерно распределены на стекле, иначе окрашивание будет неправильным.
2. Мазки окрашивают кристаллвиолетом в течение 2 мин.
3. Кристаллвиолет смывают раствором Люголя и заливают мазки этим же раствором на 2 мин.
4. Раствор Люголя смывают и окрашенные мазки обесцвечивают 96%-ным этиловым спиртом, погружая стекло с мазками в стакан со спир том на 30 с или промывая стекло спиртом из пипетки в течение 30 с.
5. Тщательно промывают стекло с мазками водой (предпочтительно дистиллированной) и наносят на стекло 0,1%-ный раствор фуксина или раствор Пфейфера.
6. Через 2 мин краску сливают, стекло тщательно промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют, пользуясь им мерсионным объективом. Грамположительные бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в красный или розовый цвет дополнительного красителя (фуксина).
7. Зарисуйте каждый препарат в альбом.
Лабораторная работа № 10. Экспресс-метод определения грам-типа микроорганизмов, микробиология
лабораторная работа № 10 Экспресс-метод определения грам-типа микроорганизмов
Цель работы.
Ознакомиться с техникой определения грам-типа микроорганизмов.
Материалы и оборудование
. Микроскоп, предметные стекла, бактериологическая петля, спиртовка, чистые предметные стекла, чистые культуры контрольных (с известным типом окраски) грамположительных и грамотрицательных бактерий и исследуемые микроорганизмы, раствор 3%-ного КОН.
Ход выполнения работы
1. На одно предметное стекло нанесите две капли раствора 3%-ного КОН. В первую каплю внесите бактериологической петлей контрольную грамположительную культуру, а во вторую - грамотрицательную кон трольную культуру.
2. Тщательно перемешайте грамположительную культуру в первой капле с раствором КОН, через 5 - 10 с медленно приподнимите бактерио логическую петлю и убедитесь, что вязкость капли не изменилась, то есть слизь не образуется и реакция отрицательная.
3. Тщательно перемешайте грамотрицательную культуру во второй капле с раствором КОН и через 5 - 10 с медленно приподнимите бактерио логическую петлю на высоту 2 - 3 см. Образовавшаяся слизь свидетельст вует о том, что КОН разрушает бактериальную клеточную стенку и ДНК 29 остается свободной (слизистое образование), т.е. проба положительная, а культура является грамотрицательной.
4. Определите экспресс-методом грам-тип культур, предложенных преподавателем.
Лабораторная работа №11. Окраска капсул бактерий по методу Гинса, микробиология
Лабораторная работа № 11 Окраска капсул бактерий по методу Гинса Цель работы. Освоить окраску капсул бактерий по методу Гинса. Материалы и оборудование. Микроскоп, предметные и покровные стекла, бактериологические петли, спиртовка, столик для окрашивания препаратов, промывалка с водой, полоски фильтровальной бумаги, черная тушь, смесь Никифорова, карболовый фуксин Циля, дистиллированная вода, чистые культуры бактерий, готовые препараты капсульных форм бактерий, иммерсионное масло для микроскопии. Ход выполнения работы1. Приготовьте препарат в соответствии с описанием в теоретиче ской части.
2. Просмотрите готовые препараты, предложенные преподавателем, с иммерсионной системой и зарисуйте их в альбом.
3. Просмотрите приготовленный Вами препарат с иммерсионной системой и тоже зарисуйте его в альбом.
Лабораторная работа № 12. Окраска спор бактерий, микробиология
Лабораторная работа № 12 Окраска спор бактерий Цель работы. Освоить метод окраски спор бактерий. Материалы и оборудование. Микроскоп, предметные стекла, бактериологические петли, спиртовка, столик для окрашивания препаратов, промывалка с водой, 0,5%-ный водный раствор сафранина, раствор метиленового синего по Леффлеру или малахитовый зеленый, дистиллированная вода, чистые культуры спорообразующих бактерий (Bacillus subtilis, 30 Bacillus cereus), готовые препараты споровых форм бактерий, иммерсионное масло для микроскопии. Ход выполнения работы
1. Приготовьте фиксированный мазок чистой культуры спорообразующих бактерий.
2. Налейте на предметное стекло с мазком один из красителей:
рас твор метиленового синего по Леффлеру или малахитового зеленого.
3. Зажгите спиртовку и, держа стекло пинцетом над пламенем го релки, доведите краситель до кипения. По мере испарения красителя до бавляйте новые его порции. Продолжительность окраски трехкратная по 10-15 с.
4. Затем стекло охладите, препарат тщательно промойте водой и на несите на мазок 0,5%-ный водный раствор сафранина и в течение 30 с до красьте препарат.
5. Снова препарат промойте водой и высушите фильтровальной бу магой.
6. Просмотрите с иммерсионной системой готовый препарат споро вой культуры, представленный преподавателем.
7. Просмотрите с иммерсионной системой препарат споровой куль туры, полученный Вами.
8. Все препараты зарисуйте в альбом. При правильном окрашивании вегетативные клетки окрашиваются в красный цвет, а споры в синий (при окрашивании раствором метиленового синего по Леффлеру) или в зеленый (при окрашивании раствором малахитового зеленого).
Контрольные вопросы Изучение морфологии и клеточных структур микроорганизмов посредством световой микроскопии, микробиология
Изучение морфологии и клеточных структур микроорганизмов посредством световой микроскопии, микробиология контрольные вопросы
1. Что такое капсула, каковы ее химический состав, морфология и функции?
2. Методы окраски бактериальных капсул.
3. Методы окраски клеточной стенки.
4. Окраска бактерий по Граму.
5. Окраска бактерий для определения их кислотоустойчивости.
6. Методы окраски нуклеоида у бактерий.
7. Спорообразование у бактерий, строение спор, расположение в клетке и их функции.
8. Окраска спор.
Культивирование и хранение микроорганизмов. Выделение чистых культур микроорганизмов, микробиология
Основные компоненты питательных сре: Дифференциально-диагностические (индикаторные) среды; Условия культивирования микроорганизмов; Культивирование аэробных микроорганизмов; Культивирование анаэробных микроорганизмов; Вирусология; Лабораторная работа № 14. Получение накопительной и чистой культур бактерий; Лабораторная работа № 15. Культивирование анаэробных культур бактерий; Лабораторная работа № 16. Рост микроорганизмов в периодической культуре; Контрольные вопросы основные компоненты питательных сред;
Купить растворы для микробиологии в Санкт-Петербурге , Microbiology
растворы для микробиологии
Подробнее... Купить растворы для микробиологии различного объема. Готовые растворы для микробиологии по выгодной цене. Растворы - цитологический метод (cytological method) окрашивания микроорганизмов, клеточных структур и тканей различных видов.Лабораторное оборудование для микробиологической лаборатории. микробиологическое оборудование
В компании Химснаб-СПБ можно подобрать по характеристиками и приобрести лабораторное оборудование для серологической (иммунологической) лаборатории, для осуществления различных лабораторных исследований: микробиологических исследований; биохимических исследований; молекулярно-биологических исследований. Подбор лаб. оборудования зависит от объектов исследования и целевой направленности научные исследования, диагностика заболеваний. Изучение иммунного ответа и серодиагностика заболеваний в иммунологических и серологических (serum — сыворотка крови) лабораториях. Приборы и оборудование для бактериологических, вирусологических, микологических и серологических (иммунологических) лаборатории.
Купить стерилизаторы, sterilizers в Санкт-Петербурге
стерилизаторы воздушные, сухожаровые
Подробнее... Купить стерилизаторы воздушные, сухожаровые - sterilizers air в ХИМСНАБ-СПБ, контактный телефон +7-812-337-18-93. Стерилизатор может быть использован для дезинфекции и сушки медицинских изделий. Основное предназначение сухожаровых стерилизаторов воздушных: стерилизация хирургических инструментов, стерилизация стеклянной посуды, стерилизация термостойких шприцев (с отметкой 20...Купить термостатирующее оборудование (термостаты), temperature equipment (thermostats) в Санкт-Петербурге
термостаты
Подробнее... (plugin.block types_of_thermostats) Купить термостаты - thermostats в ХИМСНАБ-СПБ, контактный телефон +7-812-337-18-93. Купить в Санкт-Петербурге по выгодной цене. Современные приборы позволяющие поддерживать постоянную, заданную температуру (поддержание определенного температурного баланса). Используются в различных видах деятельности: физических, химических исследований, примен...Купить шкафы сушильные, drying cabinets в Санкт-Петербурге
СНОЛ
Подробнее... (plugin.block ovens_heating_temperature) Объем рабочей камеры может составлять: 40-60 дм3. Купить СНОЛ - ovens SNOL в ХИМСНАБ-СПБ, контактный телефон +7-812-337-18-93. Купить сушильный шкаф в Санкт-Петербурге по выгодной цене. шкафы сушильные drying cabinets шкафы сушильные, drying cabinets СНОЛ СНОЛ оборудование для контроля температуры и влажности, лабораторная электропеч...другие сушильные шкафы
Подробнее... (plugin.block ovens_heating_temperature) Широчайший выбор лабораторных сушильных шкафов. Купить шкафы сушильные для быстрого и равномерного нагрева, объемом сушильной камеры от 20 до 1000 л - drying cabinets в ХИМСНАБ-СПБ, контактный телефон +7-812-337-18-93. Средней наивысшей точкой нагрева данных моделей является температура 300°С. Отдельные модели приборов снабжаются обратным таймером...Купить перемешивающие устройства, magnetic stirrers в Санкт-Петербурге
магнитные мешалки
Подробнее... Современное электрическое лабораторное оборудование для бесшумного перемешивая жидкостей, растворов в малом объеме находящее свое применение в фармацевтических, клинических, медицинских, исследовательских и научных лабораториях. Лабораторное устройство, которое использует вращающееся магнитное поле для того, чтобы мешалка (или якорь), погруженный в жидкость или раствор, вращалась очень быстр...Купить весовое оборудование, weight equipment в Санкт-Петербурге
аналитические весы
Подробнее... Купить аналитические весы - analytical balance в ХИМСНАБ-СПБ, контактный телефон +7-812-337-18-93. Купить весы аналитические в Санкт-Петербурге по выгодной цене - современное весовое оборудование, лабораторная продукция нового поколения. Приборы отличаются достаточно приемлемой ценой. -соответствуют всем современным требованиям к подобному оборудованию и имеют сертификаты качества. ...лабораторные весы
Подробнее... Современные электронные позволяют проводить измерение веса в различных единицах измерения на выбор пользователя, функция выбор единиц измерения : грамм, карат, %, шт. Это очень удобная функция автоматического перевода одних значений в другие. Как подобрать электронные лабораторные весы для лаборатории В разделе каталога ХИМСНАБ-СПБ весового оборудования можно подобрать модель весов и...Купить расходные материалы для лабораторий, consumables for laboratories в Санкт-Петербурге
фильтры бумажные
Подробнее... Купить фильтры бумажные, фильтровальную продукцию - filters paper, filter products: круглой или прямоугольной формы в ХИМСНАБ-СПБ, контактный телефон +7-812-337-18-93. Компания ХИМСНАБ-СПБ поставляет широкий ассортимент расходных материалов, фильтрующих элементов, бумажных фильтров различного назначения и скорости фильтрации, аналитических фильтров, индикаторной бумаги различных произво...индикаторная бумага для анализа жидких сред
Подробнее... Купить индикаторная бумага для анализа жидких сред и проведения лабораторных тестов на кислотность / щелочность определения визуально показателя pH в водных растворах, анализ кислотно-основных показателей растворов - test paper for analysis of liquid media в ХИМСНАБ-СПБ, контактный телефон +7-812-337-18-93. Купить индикаторную бумага для анализа в Санкт-Петербурге по выгодной цене, прод...Лабораторная посуда для лаборатории
Лабораторная посуда: пробирки, колбы, чашки Петри, матрацы, флаконы, ампулы, пастеровские и градуированные пипетки и др..Предствленная информация на страницах данного интернет-сайта и в каталоге продукции носит исключительно информационный характер и ни при каких условиях не является публичной офертой, определяемой положениями Статьи 437 (2) Гражданского кодекса РФ. Для получения подробной информации о наличии и стоимости указанных товаров и (или) услуг,обращайтесь к менеджерам отдела продаж: форма обратной связи, e-mail, телефон.
Реализация продукции для сельского хозяйства, химической, строительной, нефтегазовой, металлургической, текстильной, кожевенной, и других отраслей промышленности.
Рады проконсультировать Вас
Менеджер ХИМСНАБ-СПБ
Предлагаем широкие возможности для комплектации химической продукцией производства и исследовательских лабораторий в различных отраслях промышленности.
«ХИМСНАБ-СПБ» - Ваш надежный поставщик
Поставка химической продукции и лабораторного оборудования является ключевым направлением деятельности компании с 1996 года.
Компания «ХИМСНАБ-СПБ» успешно осуществляет поставку широкого спектра лабороторного оборудования, приборов и другой химической продукции на рынке Северо-Запада Российской Федерации.
О компании Химснаб-СПБ
